EAT Chudinov, V.A. प्लेटोनोभ, ए.भी. अलेक्जान्ड्रोभा, S.N. इलान्स्की
यो भर्खरै देखाइएको छ कि ascomycete फg्गस Ilyonectria क्रेसा आलु कन्द संक्रमित गर्न सक्षम छ। यो काम पहिलो हो जैविक विशेषताहरू र I को केहि फ्या fun्गीसाइड प्रतिरोध प्रति विश्लेषण। क्रस्सा तनाव आलुबाट पृथक। "आलु" तनावको प्रजाति-विशिष्ट क्षेत्रहरूको अनुक्रम नारसिसस, जिनसेng्ग, एस्पेन र बीच, लिली बल्ब र ट्युलिप पातहरूको जराबाट पृथक गरिएको फ fun्गीको लागि पहिले प्राप्त गरिएकोसँग मिल्छ। स्पष्ट रूपमा, धेरै जंगली र बगैंचा बिरूवाहरू I. क्रास्साको भण्डार हुन सक्छन्। अनुसन्धानले संक्रमित टमाटर र आलुका स्लाइसहरू छोप्यो, तर सम्पूर्ण टमाटर फल र अखण्ड आलु कन्दलाई संक्रमित गरेन। यसले देखाउँदछ कि I. क्रेसा घावको परजीवी हो। पौष्टिक माध्यममा फ्लिडिओक्सोनिल, डिफेभेनकोनाजोल र एजोक्सीस्ट्रोबिन प्रतिरोधको मूल्या्कनले यी औषधिहरूको उच्च प्रभावकारिता देखायो।
EC50 सूचक (फg्गासिडको एकाग्रता, जुन गैर-फg्गासिड नियन्त्रणको तुलनामा उपनिवेशको रेडियल बृद्धिको २ गुणाले धीमा हुन्छ) ०. to बराबर थियो; Respectively..2 र mg मिलीग्राम / एल क्रमशः। आ। क्रेसाको कारण हुने रोगको विकासको सम्भावनालाई ध्यानमा राख्नुपर्दछ जब आलु कन्दहरूको फाइटोपाथोलोजिकल मूल्या and्कन र बोटबिरुवा संरक्षण उपायहरूको विकास।
फाइटोपाथोजेनिक सूक्ष्मजीवहरूको विकासले आलु खेती गर्ने र भण्डारण गर्ने सबै चरणहरूमा उच्च घाटा निम्त्याउँछ। सुरक्षा उपायहरूको योजना बनाउँदा, नियमको रूपमा प्रख्यात रोगजनकहरूलाई ध्यानमा राखिन्छ, जस्तै जेनरा अल्टेरानेरिया, फुसारीम, फोमा, हेल्मिन्थोस्पोरियम, कोलेटोट्रिचम, फाइटोफोथोरा, आदि। यी हालका बर्षहरूमा, आलुहरूमा नयाँ फाइटोपाथोजेनिक सूक्ष्मजीवहरूको उपस्थितिको बारेमा अधिक र अधिक रिपोर्टहरू देखा परेका छन्। तिनीहरूको जीवविज्ञान राम्रोसँग अध्ययन गरिएको छैन, आलुहरूमा उनीहरूको सम्बन्धमा प्रयोग गरिएको फgic्गीसाइड्सको प्रभावकारिता अज्ञात छ, निदान विधिहरू विकसित भएका छैनन्। जन विकासको साथ, तिनीहरू आलु बालीलाई महत्वपूर्ण क्षति पुर्याउन सक्षम छन्। यी सूक्ष्मजीवहरू मध्ये एक ascomycete फंगस Ilyonectria crassa (Wollenw।) A Cabral & Crous, पहिलो आलु कन्द मा लेखक द्वारा पत्ता लगाइएको थियो (Chudinova एट अल।, २०१))।
यो कार्यले I. को विश्लेषणको परिणाम प्रस्तुत गर्दछ। आलु कन्दहरूबाट पृथक गरिएको क्रेस्टा तनाव। कालोनीहरूको मोर्फोलोजी र I. को कन्सरा संरचनाहरू, प्रजाति-विशिष्ट डीएनए क्षेत्रहरूको न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम, आलु र टमाटरको विषाक्तता, र केही लोकप्रिय फgic्जाकाइड प्रतिरोधको अध्ययन गरिएको थियो।
सामग्री र विधिहरू
हामीले I. क्रेसा १KKSuPT18 तनाव कोस्ट्रोमा क्षेत्रमा बढेको प्रभावित आलु कन्दबाट २०१ 2 मा पृथक राख्यौं। कन्दलाई सुख्खा सड्नको प्रकारले हल्का खैरो माइसेलियमले छोपेको गुफासँग प्रभावित भयो। एक बाँझ विच्छेदन सुईको प्रयोग गरेर, फgal्गाल माइसीलियम पेटगर डिशमा आगर मध्यम (बियर वर्ट १०%, अगर १. 2018%, पेनिसिलिन १००० यु / एमएल) को साथ स्थानान्तरण गरियो। प्लेटहरू अन्धकारमा २° डिग्री सेल्सियस मा उष्माएको थियो।
एक आईसीसी HD० एचडी डिजिटल क्यामेराको साथ एउटा लाइका DM2500 लाइट माइक्रोस्कोप र आईसी H० एचडी डिजिटल क्यामेरा (लाइका माइक्रोसिस्टम, जर्मनी) को साथ एक लाइका एम 50 दूरबीन माइक्रोस्कोप फोटो, अणुबारी र बीजाणु अ organs्गहरूको आकार र आकृति विज्ञानको मूल्यांकन गर्न प्रयोग गरियो।
डीएनएलाई अलग गर्नका लागि, फgal्गल माइसेलियम तरल मटरमा उब्जाउँथ्यो, त्यसपछि तरल नाइट्रोजनमा फ्रिज गरिएको, होमोजाइनाइज्ड, सीटीएबी बफरमा इन्क्वेटेड, क्लोरोफर्मले शुद्धीकरण गरियो, र %०% रक्सीले दुई पटक धोइन्छ।
DNA निकाल्ने विधि Kutuzova एट अल द्वारा लेखमा विस्तृत वर्णन गरिएको छ। (२०१ 2017)
आणविक विधिद्वारा प्रजातिहरू निर्धारण गर्न र अन्य ज्ञात आई। क्रेसा स्ट्रिनहरूसँग तुलना गर्न, पीसीआर प्राइमरहरूको साथ गरिएको थियो जसले प्रजाति-विशिष्ट डीएनए क्षेत्रहरूको प्रवर्धन अनुमति दिन्छ: आईटीएस १-,,1 एस-आईटीएस २ (प्राइमर आईटीएस TS / आईटीएस,, व्हाइट एट अल।, १ 5,8 2 ०), जीन क्षेत्रहरू बी -tubulin (Bt5a / Bt4b, ग्लास, डोनाल्डसन, १ and 1990)) र अनुवाद विस्तार कारक १α (tef2α) (प्राइमर EF2-1995F / EF1-1R, कार्बन र कोह्न, १ 1 728।)। ईभ्रोजेन क्लीनअप किट प्रयोग गरेर इच्छित लम्बाइको एम्प्लिकन्स जेलबाट निकालिए। एम्प्लीफाईड क्षेत्रहरू बिगडाई टर्मिनेटर v1 साइकल सिक्वेन्सिंग किट (एप्लाइड बायोसिस्टम, सीए, संयुक्त राज्य अमेरिका) प्रयोग गरेर एक एप्लाइड बायोसिस्टम 986 1999० एक्सएल स्वचालित अनुक्रमक (एप्लाइड बायोसिस्टम, सीए, युएसए) प्रयोग गर्दै थिए। परिणामस्वरूप न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमहरू यूएस नेशनल सेन्टर फर बायोटेक्नोलोजी इन्फोर्मेशन (NCBI) को GenBank डाटाबेसमा खेलको लागि खोजी गर्न प्रयोग गरियो। फिलोजेनेटिक विश्लेषण MEGA 3.1 प्रोग्राम (Tamura et al।, २०१)) प्रयोग गरेर गरिएको थियो।
भाइरलन्स को निर्धारण एक ठूलो-फलदार टमाटर (विभिन्न प्रकारका डब्राभा) र आलु कन्द (विविध गाला) को सम्पूर्ण हरियो फलहरुमा गरिन्छ। थप रूपमा, क्षतिग्रस्त फलहरू र कन्दहरूमा भएको क्षतिलाई नक्कल गर्न हामीले उही फल र कन्दहरूको स्लाइसहरू प्रयोग गर्यौं। कन्दको टुक्रालाई आर्द्र कोठामा राखिएको थियो जुन पेट्री डिशहरू थिए जसको तल्लो ठाउँमा भिजा फिल्टर कागजहरू थिए। कागजमा स्लाइड राखिएको थियो, जुनमा, बारीमा, कन्द वा फलको स्लाइस राखियो। सम्पूर्ण कन्द र फलहरू पनि कन्टेनरमा तल राखिएको भिजा फिल्टर पेपरको साथ राखिएको थियो। स्लाइसको केन्द्रमा (वा कन्द वा फलहरूको अक्षत सतहमा), फ fun्गर हाइफाइको साथ अगरको एउटा टुक्रा (× × mm मिमी) वर्ट अगरमा बढेको ag दिन पछि राखिएको थियो।
फgic्गल स्ट्राइन्सको फ fun्गीसाइडमा प्रतिरोधको आकलन प्रयोग पोषण माध्यमहरूमा प्रयोग पोषण माध्यमहरूमा गरिएको थियो। हामीले फ fun्id्गीडाइडल ड्रग्स म्याक्सिम, केएस (सक्रिय संघटक फ्लिडिओक्सोनिल, २ / g / l), क्वाड्रिस, केएस (एजेक्सिस्ट्रोबिन २ g० g / l), स्कोअर, ईसी (डिभिनेकोनाजोल २ 25० g / l) (राज्य सूची ..., २०२०) को संवेदनशीलता अध्ययन गरेका छौं। मूल्यांकन वर्ट-अगर मध्यममा पेट्री डिशमा सक्रिय पदार्थ ०.१ को सांद्रतामा अध्ययन गरिएको औषधीहरूको थपसँगै गरिएको थियो; एक १० पीपीएम (मिलीग्राम / एल) (फ्लिडिओक्सोनिल र डिफेनोकोनजोलको लागि), १; दस; १०० पीपीएम (एजोक्सीस्ट्रोबिनको लागि) र मिडियामा फ fun्गलसाइड (नियन्त्रण) बिना। फ fun्गीसाइडलाई पिघलियो र °० डिग्री सेल्सियस मध्यममा ठंडा गरियो, त्यसपछि मध्यम पेट्री भाँडामा खन्याइयो। फंगल माइसेलियमको साथ अगर ब्लक पेट्री डिशको बिचमा राखिएको थियो र अन्धकारमा २ 250 डिग्री सेल्सियसको तापक्रममा संस्कृतिमा राखिएको थियो। इनक्यूबेशनको days दिन पछि, उपनिवेशहरूको व्यास दुई पारस्परिक लम्ब दिशाहरूमा मापन गरियो; प्रत्येक कालोनी को लागी मापन परिणाम औसत थियो। प्रयोगहरू त्रिपिमा गरिएको थियो। विश्लेषणको नतीजाको आधारमा, EC250 गणना गरिएको थियो, फg्गासिडको एकाग्रता बराबर थियो, जसले फgic्फुसीडाल नियन्त्रणको सापेक्ष उपनिवेशको रेडियल बृद्धिदर आधा बनायो।
परिणाम र छलफल
वर्ट अगरको साथ पेट्री भाँडामा, फ fun्गलले सेतो फ्लोकुलन्ट मायसेलियमको साथ कालोनीहरू बनायो। माइसिलियम मुनि मध्यम मध्यम रातो खैरो भयो। जब मध्यम सुक्खा हुन्छ, फg्गसले सानो स्पोरोडोचियामा एकल र समग्र कनिडियोफोरहरूमा दुई प्रकारको बीजाणुहरू गठन गर्दछ। म्याक्रोक्रोनिडिया विस्तारित, बेलनाकार छन्, एक देखि तीन सेप्टाको साथ, औसत लम्बाई २.27.2.२ सुक्ष्ममा २.23.2.२ देखि .32.2२.२ माइक्रोनको चौडाइ, चौडाई - 4.9 माइक्रोनसम्म (चित्र १)। माइक्रोकोनिडियाको औसत लम्बाई १.1..14.3 μm हो जुन १०..10.3 देखि १.18.1.१ μm सम्मको मानहरूको दायराको हुन्छ, र चौडाई μ.० माइक्रोनसम्म छ। सबै म्याक्रो र माइक्रोमोर्फोलजिकल वर्णहरू Ilyonectria crassa (Cabral et al।, २०१२) प्रजाति को भिन्नता को दायरा मा फिट।
प्रजाति-विशिष्ट डीएनए क्षेत्रहरूको अनुक्रम (आईटीएस, बी-ट्युबुलिन, TEF १α) पूर्ण रूपमा I को अनुक्रम संग मेल खान्छ। हामीले अध्ययन गरेका क्रेस्टा उपभेद (चुडिनोभा एट अल।, २०१,, तालिका १)। अन्य क्षेत्रहरूमा I. क्रेसाको व्यापकता अध्ययन गर्न र प्रभावित संस्कृतिहरूको वर्णक्रम विश्लेषण गर्न, GenBank डाटाबेसमा समान DNA अनुक्रम विश्लेषण गरिएको थियो (तालिका १)। अधिव्यापन to 1 देखि १००% थियो। "आलु" I. क्रेस्टा तनावका तीनै डिएनए क्षेत्रहरूको क्रमक्रम नेदरल्याण्ड्सको लिली बल्ब र नारिसिसस जराबाट र क्यानाडाको जिनसेng्ग जराबाट पृथक गरिएको तनावको अनुक्रम जस्तै थियो। हामी खुला I डेटाबेसमा तीन विश्लेषण समान अनुक्रमको साथ I I क्रेस्टा स्ट्रिनहरू फेला पार्न असफल भयौं। यद्यपि, जम्मा गरिएको आईटीएस र बी-ट्युबुलिन दृश्यहरूको विश्लेषणले बेलायतमा ट्यूलिप पातहरूमा आई। क्रास्साको उपस्थिति देखायो। समान आईटीएस अनुक्रमको साथको फुंगीलाई क्यानाडामा एस्पेन जराको माइकोबियोटा र इटालीको बीच जरा, साउदी अरेबियामा आलु कन्द (तालिका १) को विश्लेषणमा पहिचान गरियो। यस अध्ययनको परिणामले देखाउँदछ कि I. क्रेसाको विश्वव्यापी वितरण छ र बिभिन्न प्रजातिहरूलाई संक्रमित गर्न सक्षम छ।
Tomato दिन टमाटर र आलुको स्लाइसमा रोगजनकता निर्धारण गर्दा घाँसको व्यास १. cm सेन्टीमिटर पुगेको थियो। अनुसन्धानको तनावले सम्पूर्ण टमाटर फल र अखण्ड आलु कन्दलाई संक्रमित गर्दैन। जे होस्, टुप्पोमा सिप्पलहरू प्रभावित भए। प्रदूषणको सम्भावनालाई हटाउन, आलु कन्दको स्लाइसमा विकसित माइसेलियमबाट फंगललाई पृथक गरेर शुद्ध संस्कृतिमा राखियो। यो पूर्ण रूपमा अभिभावकको तनाव जस्तै थियो। स्पष्ट रूपमा, I. क्रेसा घावको परजीवी हो।
फ tub्गीसाइडका साथ बीज कन्दहरूको पूर्व-रोपण उपचारले बढ्ने मौसममा बोटबिरुवामा रोगहरूको विकास घटाउँछ। प्रभावशाली फgic्गीसाइड्स को छनोटको लागि, ती कुन आई विरुद्ध प्रभावी छ भनेर निर्धारण गर्न महत्त्वपूर्ण छ। कामले फgic्जिकियोसाइड, एजोक्सीस्ट्रोबिन, डिफिनेकोनाजोलको व्यापक सक्रिय पदार्थहरूको अध्ययन गर्यो। फुलिडिओक्सोनिल बिरुवा रोप्नु अघि बिउ र बीजको कन्द्रीका लागि प्रयोग गरिने धेरै मिश्रणहरूमा समावेश हुन्छ। Fludioxonil (अधिकतम) भण्डारण गर्नु भन्दा पहिले बीज कन्दहरूको उपचार गर्न पनि प्रयोग गरिन्छ। डिफेनोनाकाजोल र एजोक्सीस्ट्रोबिन पनि बीज सामग्री प्रशोधनका लागि प्रयोग गरिने थुप्रै तयारीमा साथै वनस्पति बोटबिरुवा प्रशोधनका लागि तयार गरिएको तयारीमा पनि समावेश छ (राज्य क्याटलग ..., २०२०)।
I. क्रेसाको वृद्धि दर मिडियामा अध्ययन गरियो (छवि २) सक्रिय पदार्थहरूको विभिन्न सांद्रताको साथ: फ्लिडिओक्सोनिल (EC2 = ०. p पीपीएम), एजोक्सीस्ट्रोबिन (EC50 = p पीपीएम), र डिफेनोकनाजोल (EC0.4 = .50..4 पीपीएम) (तालिका २)। यी तयारीहरू I. क्रेसाको बिरूद्ध अत्यन्त प्रभावकारी मान्न सकिन्छ किनकि उनीहरूको EC50 कन्दको उपचारका लागि प्रयोग हुने तरल पदार्थमा तयारीको सिफारिश गरिएको सघनता भन्दा उल्लेखनीय रूपमा कम छ। राज्य क्याटलगका अनुसार ... (२०२०), आलु कन्दको उपचारको लागि तरलमा फ्लिडिओक्सोनिलको एकाग्रता 7.4०० देखि १००० पीपीएम, एजोक्सीस्ट्रोबिन (फेरोको तल्लो भागको उपचारको लागि तरलमा) - 2 50-०-2020 पीपीएम, डिभिनेकोनाजोल (वनस्पति वनस्पति उपचारको लागि तरलमा) - १ in in.–– 500२। पीपीएम।
तालिका १. Genbank डाटाबेसमा प्रजाति-विशेष प्रकारको अनुक्रमको समानता, जुन १KKSuPT1 स्ट्रान र Ilyonectria क्रेसाको स्ट्रैन्सका अनुक्रमहरू।
तनाव | होस्ट प्लान्ट, उत्सर्जन साइट | अनुक्रम संख्या GenBank मा जमा, समानताहरूको प्रतिशत | लिङ्क | ||
यो | tub-ट्यूबुलिन | TEF १α | |||
17KSPT1 र 18KSuPT2 | आलु कन्द, Kostroma क्षेत्र | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova एट अल।, २०१ 2019, यो काम |
सीबीएस १158/31१ | नरसिसस जरा, नेदरल्याण्ड | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Cabral et al।, २०१२ |
सीबीएस १139/30१ | लिली बल्ब, नेदरल्याण्ड्स | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | जिन्सेng्ग जड, क्यानडा | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735 / 725 99.6 |
|
RHS235138 | ट्यूलिप पात, युके | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | डेन्टन, डेन्टन, २०१। |
MT294410 | एस्पेन जड़ों, क्यानडा | MT294410 100 | ND | ND | रम्सफील्ड एट अल।, २०२० |
ER1937 | बिच, इटाली | KR019363 99.65 | ND | ND | टिज्नी, हागी, मोटा। प्रत्यक्ष प्रस्तुति |
KAUF19 | आलु कन्द, साउदी अरेबिया | HE649390 98.3 | ND | ND | Gashgari, Gherbawy, २०१। |
एनडी = जम्मा गरिएको छैन
तालिका २. Ilyonectria क्रासाको फgic्गीसाइड्सको प्रतिरोध
(सक्रिय पदार्थ) | EC50, पीपीएम | ||||
3 दिन | 5 दिन | 7 दिन | |||
नियन्त्रण गर्दछ | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
क्वाड्रिस, KS (fsoxystrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
म्याक्सिम, KS (fludioxonil) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
Skor, EC (difenoconazole) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
हाम्रो काममा, I. क्रेसा स्ट्रेन्स कोस्ट्रोमा र मस्को (Chudinova एट अल।, २०१)) क्षेत्रहरूमा आलु कन्दहरूबाट पृथक गरिएको थियो। I. को समान आईटीएस अनुक्रमको साथ फ fun्गल तनावको एक उच्च अनुपात साउदी अरेबिया (गश्गारी र गेर्बवाई, २०१ash) मा आलु कन्दको माइकोबियोटा विश्लेषण गर्दा खुलासा भएको थियो। स्पष्ट रूपमा, I. क्र्सा आलुहरूमा यस्तो दुर्लभ जस्तो देखिदैन जस्तो देखिन्छ। हाम्रो प्रयोगले देखायो कि फg्गलसले क्षतिग्रस्त टमाटर फलहरू संक्रमित गर्न सक्दछ। यो साहित्यबाट ज्ञात हुन्छ कि I. क्र्सा माटोमा प्रोटोप्रोफिकली (मोल एट अल।, २०१ 2019) मा विकास गर्न सक्षम छ, साथै विभिन्न बोटबिरुवालाई पनि प्रभाव पार्दछ, यहाँबाट ट्याफोनोमिक रूपमा टाढा रहेका ड्याफोडिल, लिली, जिनसेng्ग, एस्पेन, र बीचमा (तालिका २)। एक) स्पष्ट रूपमा, धेरै जंगली र बगैंचा बिरूवाहरू I. क्रास्साको भण्डार हुन सक्छन्। माथिको ले देखाउँछ कि सुरक्षा उपायहरू विकास गर्दा, यो फ fun्गसको साथ आलु कन्दहरूलाई असर गर्ने सम्भावनालाई ध्यानमा राख्नु आवश्यक छ। फ्लुडियोओक्सोनिल, एजोक्सीस्ट्रोबिन र डिफेनोनोकोजाल समावेश भएको आलु कन्दको उपचारको लागि व्यापक तयारीले आई। क्रास्साको बिरूद्ध उच्च फid्गीसाइडल प्रभावकारिता देखाएको छ।
यस कार्यलाई आधारभूत अनुसन्धानका लागि रूसी फाउन्डेसनले समर्थन गरेको थियो (अनुदान नम्बर २०-०१--००१20)
उक्त लेख पत्रिका "प्लान्ट प्रोटेक्शन बुलेटिन", २०२०, १०2020 ()) मा प्रकाशित भयो