D. यु। र्याजान्त्सेभ, E. एम। Chudinova, L. Yu। Kokaeva, S. N. Elansky, P. N. Balabko, G. L. Belova, S. K. Zavriev
फाइटोपाथोजेनिक फg्गलस कोलेटोट्रिचम कोकोडहरूले आलु र टमाटरमा खतरनाक रोग निम्त्याउँछ जसलाई एन्थ्रेकनोज र कन्द कालो ठाउँ भनिन्छ। आकृतिविहीन विशेषताहरूले गर्दा, तिनीहरू प्रायः अन्य सूक्ष्मजीवहरूले गर्दा भएका रोगहरू भन्दा भिन्न हुन गाह्रो हुन्छ; हरियो टमाटर फलहरुमा, रोग asymptomatic हुन सक्छ, पाकेको रातो फलहरु मा मात्र प्रकट। रोगजनकको छिटो र सटीक निदानको लागि, वास्तविक-समय पीसीआर परीक्षण प्रणाली प्रस्ताव गरिएको छ। एक परीक्षण प्रणालीको विकासको लागि, रूसको विभिन्न क्षेत्रहरूमा आलु कन्दहरूबाट अलग्गिएको ग्लिसरॉल ट्राइफोस्फेट डिहाइड्रोजनेस जीनको न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम was 45 सी।
GenBank डाटाबेसमा उपलब्ध अन्य प्रजातिको समान अनुक्रमहरूको परिणामहरू र विश्लेषणको आधारमा, प्रजाति-विशिष्ट प्राइमरहरू र सी। कोकोडहरूको लागि अनुसन्धान डिजाइन गरिएको थियो। सिर्जना गरिएको परीक्षण प्रणालीको विशिष्टता जाँच्न, पीसीआर टमाटर र आलु बोटसँग सम्बन्धित १ different विभिन्न प्रजातिको परजीवी र सप्रोट्रफिक फgi्गीको शुद्ध संस्कृतिबाट पृथक डीएनएसँग गरिएको थियो (फुसारीयम अक्सिस्पोरम, एफ। वर्टिसिलियम, फोमपोसिस फेलोली, अल्टेरानिया अल्टरनेटा, हेलमिन्थोस्पोरियम सोलाइकोलोकोटस Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis Folioli, Neonectria Radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp। कोलेटोट्रिचम कोकोड डीएनएको उपस्थिति २०–२– को एक चक्रमा निर्धारित गरिएको थियो, जबकि अन्य प्रजातिहरू cy० चक्र पछि पत्ता लाग्यो वा पत्ता लगाएन। परीक्षण प्रणालीले विश्वसनियपूर्वक C कोकोडहरू DNA सघनता ०.०१ ng / mm15 विश्लेषण गरिएको PCR मिश्रणमा पत्ता लगाउन सम्भव बनाउँदछ। विकसित परीक्षण प्रणालीको प्रयोग गरेर, टमाटरको पातमा सी कोकोडहरूको उपस्थितिमा फंगल रोगको लक्षणहरू र आलु कन्दहरूमा रोगको बाह्य लक्षणबिना अनुसन्धान गरियो। फ fun्गल संक्रमणको लक्षणसहित पातहरू क्रास्नोडार क्षेत्रको दुई अलग क्षेत्रबाट कन्द स --्कलन गरियो - कोस्ट्रोमा, मस्को, कालुगा, निज्नी नोभगोरोड क्षेत्रका क्षेत्रहरूबाट। एउटा टमाटरको पात सी। कोकोड DNA भएको Krasnodar टेरीटरीमा फेला पर्यो; कोस्ट्रोमा, मस्को, कालुगा क्षेत्रहरूमा उत्पादन भएको कन्दका samples नमूनाहरूमा यस रोगको डीएनएको उल्लेखनीय उपस्थिति फेला पर्यो।
परिचय
कोलेटोट्रिचम जीनसको फुँजी खतरनाक फाइटोपाथोजेन हो जसले अन्न, तरकारी, जडिबुटी, बारहमासी फल र बेरी बोटलाई असर गर्दछ। यस जीनसको सर्वव्यापी प्रजाति मध्ये एक कोलेटोट्रिकम कोकोड (वालर) हो।
ह्युजेस, एन्थ्रेकोनोज र आलु र टमाटरको कालो दागको कारक एजेंट हो, र सोलानासी परिवारका अन्य बोटबिरुवाहरूको धेरै संख्यामा रोगहरू निम्त्याउँछ। झार (डिलार्ड, १ 1992 1998 २)। सी। कोकोड्सले बोटको सबै भूमिगत भागहरू, स्टेम बेसहरू, पातहरू र फलहरू असर गर्दछ (एन्ड्रिभन एट अल।, १ 1994 XNUMX;; जॉनसन, १ XNUMX XNUMX))। संक्रमित आलु कन्दको बोक्रामा, छुट्टै ठाँउ भएको किनारहरूसहित खैरो दागहरूको विकास अवलोकन गरिन्छ, जसमा स्पोरुलेसन र माइक्रोस्क्लेरोटियाको कालो थोप्लाहरू स्पष्ट देखिन्छन्। भण्डारणको क्रममा, नरम सामग्रीसहित अल्सर कन्दको लुगाहरूमा गठन हुन सक्छ, अर्थात्। यो रोग एन्थ्रेकनोज चरणमा प्रवेश गर्दछ, जुन जे होस्, धेरै दुर्लभ छ।
त्यहि समयमा, एन्थ्राकोनोजका लक्षणहरू (साना कालो थोप्लाहरूको साथ छालाको अल्सर) टमाटर फलहरूमा विशिष्ट छन्। पातहरूमा सी। कोकोडका लक्षणहरू गाढा खैरो दागका रूपमा देखा पर्दछ, सामान्यत: पहेलो टिश्युद्वारा बर्डर्ड (जोनसन, १ 1994 XNUMX))।
कन्दहरूमा कालो दागको विकासले तिनीहरूको उपस्थिति बिगार्दछ, जो विशेष गरी धुने रातो बोक्रा आलु बेच्ने बेलामा उच्चारण गरिन्छ। पिल एक्सफोलिएसनले अधिक वाष्पीकरण र भण्डारन बृद्धि बढाउछ (हंगर, म्याकइन्टायर, १ 1979।))। अन्य बोटबिरुवाका अंगहरूलाई हानी हुँदा उपज घाटा हुन्छ, जुन खुला र बन्द दुबै जमिनमा उल्लेख गरिएको थियो (जोनसन, १ 1994 1999;; स्रोर एट अल।, १ 2003 2018।)। सी। कोकोडका कारण हुने रोगहरू विश्वका लगभग सबै आलू उत्पादक क्षेत्रहरूमा रसियालगायत (लीसा, हिल्टन, २०० 1995; बेलव एट अल, २०१)) मा सामान्य हुन्छन्। यी रोगहरूको नियन्त्रण सी सी कोकोडहरू विरूद्ध प्रतिरोधी फgic्गीसाइडको अपर्याप्त प्रभावकारिता र प्रतिरोधी प्रजातिहरूको अभावको कारण पढ्न गाह्रो छ (पढ्नुहोस्, लुकाउनुहोस्, १ XNUMX XNUMX।)।
सी। कोकोड ईनोकुलमले बीज कन्दहरूमा रहिरहन सक्छ (पढ्नुहोस्, लुकाउनुहोस्, १ 1988 1997 Joh; जोनसन एट अल। ; डिल्लार्ड, कोब, १ 2010 1990)) र झारमा (रेड, पेनीपाकर, १ 1993 1987)। धेरै लेखकहरू (पढ्नुहोस्, लुकाउनुहोस्, १ 1988 1992; बार्कडोल, डेभिस, १ 1997 1993 २; जोनसन एट अल।, १ XNUMX XNUMX;; डिल्लार्ड, कोब, १ XNUMX XNUMX)) ले देखाए कि आलु र टमाटरमा रोगको विकास मुख्यतया बीजमा ईनोकुलमको उपस्थितिमा निर्भर छ र माटो त्यसकारण, रोगबाट हुने क्षतिहरूलाई कम गर्न, बीज सामग्रीमा, माटोमा, बीउ आलु कन्द र टमाटरको बीउ भण्डारनको लागि राखिएको माउमा फg्गसको प्रोपोजिसहरू (मात्रात्मक सहित) निदान गर्न आवश्यक छ। माटो र बोटबिरुवाको सामग्रीमा मोर्फोलजिकल डायग्नोस्टिकहरू केवल माइक्रोस्क्लेरोटियाको उपस्थितिबाट मात्र गर्न सकिन्छ, जुन अन्य प्रकारका फ fun्गरमा पनि पाइन्छ।
कन्दका लक्षणहरू सिल्भरी स्केबसँग मिल्दोजुल्छन् जुन फg्ग्रस हेलमिन्थोस्पोरियम सोलानीको कारणले हुन्छ। कोलेटोट्रिचम कोकोड र हेल्मिन्थोस्पोरियम सोलानीको शुद्ध संस्कृतिमा अलग्गै बस्नु गाह्रो छ र पोषणयुक्त माध्यमको सुस्त वृद्धिको कारण लामो समय लिन्छ। छिटो कोलेटोट्रिचम कोकोड पहिचान गर्न, इन्स्ट्रूमेन्ट निदान विधिहरू प्रयोग गर्नु आवश्यक छ। सब भन्दा सुविधाजनक विधि भनेको पोलीमेरेज चेन रिएक्शन (PCR) र यसको परिमार्जन - वास्तविक-समय PCR। हाल, आरडीएनए को ITS2002 क्षेत्र को लागी ब्रिटिश अनुसन्धानकर्ताहरु द्वारा विकसित एक परीक्षण प्रणाली (Cullen et al।, २००२) यूरोप र संयुक्त राज्य अमेरिका मा प्रयोग गरीन्छ। यसको प्रयोगले रूसी पृथक (Belov et al, २०१)) को विश्लेषणमा राम्रो परिणाम देखायो। जे होस्, सी। कोकोड अत्यधिक परिवर्तनशील छ र एकल DNA अनुक्रमबाट यसको पत्ता लगाउँदा गलत नकारात्मक परिणाम निम्त्याउन सक्छ। अधिक भरपर्दो निदानको लागि, यो विभिन्न प्रजाति-विशिष्ट डीएनए दृश्यहरूको विश्लेषण गर्न आवश्यक छ, जसको सम्बन्धमा हामीले एउटा मौलिक परीक्षण प्रणाली विकास गरेका छौं जसले ग्लिसेराल्डिहाइड---फास्फेट डिहाइड्रोजनेस जीनको अनुक्रमबाट सी कोकोड पहिचान गर्न अनुमति दिन्छ।
सामग्री र विधिहरू
सिर्जना गरिएको परीक्षण प्रणालीको प्रभावकारिता र विशिष्टता जाँच्नको लागि, हामीले टमाटरको पात र फलफूल, आलु कन्द (तालिका १) को बिरामी नमूनाहरूबाट लेखकहरूले पृथक १ fun प्रजातिको फ fun्गीका शुद्ध संस्कृतिहरू प्रयोग गर्यौं। पृथकीकरणका लागि, फgal्गल संक्रमणको लक्षणसहित बोटबिरुवाका अंगहरू लिएका थिए, प्रत्येक बुश प्रति अंग भन्दा बढि।
पिलको साथ कन्दको टुक्रा, टमाटर फलको एक टुक्रा, र एक प्रभावित पात बाइनोक्युलर माइक्रोस्कोपको मुनि राखिएको थियो, त्यसपछि माइसेलियम, बीजाणु, वा ऊतकको एउटा टुक्रालाई पेट्री डिशमा एक धारदार विच्छेदन सुईको साथ एक मागरमा (वर्ट अगर) हस्तान्तरण गरियो। पृथकहरू tub डिग्री सेन्टिग्रेडमा टेब ट्यूबमा अगर स्लन्टमा भण्डार गरिएको थियो।
संकलन पछि तुरुन्त विश्लेषणको लागि राखिएका फgal्गला रोगहरूको लक्षणसहित टमाटरको पातका नमूनाहरू (खेतमा) 70०% इथिल रक्सीमा राखिएको थियो जुन तिनीहरू डीएनए एक्लोसन नभएसम्म भण्डार गरिएको थियो। आलु कन्दहरू प्रयोगशालामा डेलिभर गरियो, छिलिएको (२ × १ सेन्टीमिटरको टुक्रा) तिनीहरूबाट, र –२० ° fr मा स्थिर। DNA अलग नगरेसम्म स्थिर भण्डार गरियो।
डीएनए पृथकीकरणका लागि ढुसीको शुद्ध संस्कृति तरल मटर मध्यममा हुर्केका थिए। फफसको मायसीलियम तरल माध्यमबाट हटाइएको थियो, फिल्टर पेपरमा सुकाइयो, तरल नाइट्रोजनमा जमेको, होमोजाइनाइज्ड, सीटीएबी बफरमा इन्कोबेट गरिएको, क्लोरोफर्मले शुद्ध, isopropanol र ०.० एम पोटेशियम एसीटेटको मिश्रणको साथ precipmitted, र %०% रक्सीले दुई पटक धोइन्छ। नतिजा डीएनए विच्छेदन गरिएको पानीमा विघटन भयो र –२० ° stored (Kutuzova et al।, २०१ 0.5) मा भण्डारण गरियो। DNA एकाग्रता Qubit (.० (Qiagen, जर्मनी) मा डबल असभ्य DNA को लागी HS DNA quanificationsation Kit प्रयोग गरी मापन गरिएको थियो। मदिरायुक्त र फ्रिज गरिएको नमूनाहरू तरल नाइट्रोजनमा छाँटिएको थियो, त्यसपछि DNA निकाल्ने काम माथि वर्णन गरिए जस्तै गरिएको थियो (शुद्ध फंगल संस्कृतिहरूको माइसेलियमको लागि)।
तालिका १. प्रयोग गरिएको फgi्गी तनावको उत्पत्ति
च्याउको नाम | बोट, अंग | चयन को स्थान |
---|---|---|
कोलेटोट्रिचम कोकोड १, सी। कोकोड २, सी। कोकोड 1, इलियोनेक्ट्रिया क्रेसा, राइजोक्टोनिया सोलानी | आलु कन्द | कोस्ट्रोमा क्षेत्र, पहिलो क्षेत्र उत्पादनको आलु कन्दहरू, किसान रेड स्कारलेट |
कोलेटोट्रिचम कोकोड 4 | आलु पात | रिप मारि एल, योशकर-ओला |
हेल्मिन्थोस्पोरियम सोलानी | आलु कन्द | मगादान क्षेत्र, पोस। पाल, आलु कन्द |
क्लाडोस्पोरियम फुलभम | टमाटर पात | मस्को क्षेत्र, ठूलो फलफूल टमाटर |
Alternaria टमाटोफिला | टमाटर फल | पौध संरक्षण को अखिल-रूसी अनुसन्धान संस्थानको माइकोलोजी र फाइटोपाथोलजी प्रयोगशालाका कर्मचारी द्वारा पेश गरिएको |
फुसेरियम भर्टिसिलियम, फोमप्सिसफिसोली, अल्टेरानेरिया अल्टर्नाटा, फेल्लिनुस फेरुइनोव्लुटिनस, स्टेम्फिलियम वेसिकेरियम, क्लाडोस्पोरियम क्लैडोस्पोरियोइड्स, एक्रोडोनटियम लुजुलाइ, पेनिसिलियम एसपी। | टमाटर फल | Krasnodar क्षेत्र, Krymsky जिल्ला, ग्रेड क्रीम |
Fusarium oxysporum | गहुँको जरा | मस्को क्षेत्र |
PCR एक DTprime एम्पलीफायर (DNA- टेक्नोलोजी) मा प्रदर्शन गरिएको थियो। पीसीआरको लागि, मूल प्राइमरहरू र ग्लासरोल ट्राइफोस्फेट डिहाइड्रोजनेस जीनको प्रजाति-विशिष्ट क्षेत्रको लागि प्रयोग गरिएको थियो: अगाडि प्राइमर कोक g० जीडीएफ –टीसीएटीएजीएटीसीटीटीटीसीटीसीसीजीजीसीए, रिभर्स प्राइमर कोक २70०gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGT280। प्राइमरहरूले २१1 बीपी क्षेत्र विस्तार गर्दछ।
प्रतिक्रियाले कुल डीएनए को n० एनजी लिए (पात र कन्दहरूको विश्लेषण गर्दा) र १० एनजी (शुद्ध फंगल कल्चरहरूको डीएनए विश्लेषण गर्दा) लिए। प्रतिक्रिया मिश्रण (μ 50 μl) लाई प्याराफिन लेयरले दुई भागमा छुट्याएको थियो: तल्लो एक (२० μl) १० 10 प्रतिक्रिया बफरको μ ml (35० एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 20; २०० एमएम (एनएच)) २ एसओ;; २ m एमएम एमजीसीएल २; ०.०% बीचको) २०), प्रत्येक डिओक्सिन्यूक्लियोटाइड ट्राइफॉस्फेटको ०. m एमएम, प्रत्येक प्राइमरको pm बेलुका, र एक हाइड्रोलाइजेबल फ्लोरोसेंट जांचको pm बेलुका; माथिल्लोमा १० × पीसीआर बफरको १ μl र टाक पोलीमरेजको १ यू हुन्छ।
प्याराफिनको साथ मिश्रणको पृथक्करणले ट्यूबहरूलाई लामो समयको लागि ° डिग्री सेल्सियसको तापक्रममा भण्डारण गर्न अनुमति दिन्छ र पीसीआरको लागि तातो सुरुआत गर्न तिनीहरूलाई min० डिग्री सेन्टिग्रेड तापक्रममा १० मिनेटको लागि तताएपछि। पीसीआर निम्न कार्यक्रम अनुसार प्रदर्शन गरिएको थियो: .5 .10.० डिग्री सेल्सियस - 80 ० से (१ चक्र); .94.0 .90.० डिग्री सेल्सियस - s० से; .1 94.0.० डिग्री सेल्सियस - १ s से (cy चक्र); .30 .64.0.० डिग्री सेल्सियस - १० से; .15 5.० डिग्री सेल्सियस - १ s से (cy 94.0 चक्र); १०.० डिग्री सेल्सियस - भंडारण।
परिणाम र छलफल
ग्लाइसरोल ट्राइफॉस्फेट डिहाइड्रोजनेस जीनको क्रम रूसको विभिन्न क्षेत्रहरूमा पात, काण्ड, आलु कन्द र टमाटर फल (कुटुजोभा, २०१)) बाट अलग 45 2018 वटा तराईमा निर्धारण गरिएको थियो। सबै तनावहरूको अध्ययन गरिएका अनुक्रमहरूलाई दुई समूहमा विभाजन गरिएको थियो दुईवटा न्यूक्लियोटाइडमा फरक। KY2 र KY496634 नम्बरहरू अन्तर्गत दुबै समूहका प्रतिनिधिहरूको न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम जेन बैंकमा जम्मा छन्।
प्राइमरहरू coc70gdf, coc280gdr र cocgdz जांच तिनीहरूका आधारमा डिजाइन BLAST प्रोग्राम प्रयोग गरेर जाँच गरियो (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) ग्लाइसेरोल ट्राइफॉस्फेट डिहाइड्रोजनेस जीनको जीनस कोलेट्रोट्रिकम र अन्य जीवहरूको जीनका सबै अनुक्रमहरूमा जेनब्याक डाटाबेसमा उपलब्ध छन्।
अन्य जीवहरूको कुनै डीएनए क्षेत्रहरू प्राइमरहरूको लागि अत्यधिक समलिंगी र जांच फेला परेन।
टेस्ट प्रणालीको संवेदनशीलता सी। कोकोड DNA, आन्थ्राकोनोजबाट संक्रमित आलुको पातको DNA (सन् २०१ using मा मारि एल, प्रजाति रेड स्कार्लेटमा संकलित) का नमूनाहरूको प्रयोग गरेर जाँच गरियो, र कालो दालले कालो दागले प्रभावित (Kostroma क्षेत्रमा संकलित, विविधता रातो स्कारलेट, तालिका २)। कन्द र आलुको पातमा डीएनएको उपस्थिति पुष्टि गर्न, सी। कोकोड स्ट्रिनहरू तिनीहरूबाट शुद्ध संस्कृतिमा पृथक गरिएको थियो।
परीक्षण प्रणालीको संवेदनशीलता विश्लेषणको परिणामले देखाउँदछ कि यो सफलतापूर्वक एक नमूनामा सी। कोकोड DNA को उपस्थिति निदान गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ जब पीसीआर मिश्रणमा यसको कुल सामग्री ०.० n एनजी भन्दा बढी हुन्छ। यो पत्ता लगाउनको लागि पर्याप्त छ, किनकि एक स्क्लेरोटियामा औसत ०.0.05१ एनजी हुन्छ, र एक बीजाणुमा लगभग ०.०0.131 एनजी डीएनए हुन्छ (कुलेन एट अल।, २००२)। ब्रिटिश समूहले विकसित गरेको परिक्षण प्रणाली (Cullen et al।, २००२) ले समान संवेदनशीलता देखायो (थ्रेसोल्ड चक्र at 0.04 ०.०2002 एनजी डीएनए र 2002 34. मा ०.०g n एनजी)।
सबै केसहरूमा सी। कोकोड युक्त प्राकृतिक नमूनाहरूको विश्लेषणले नमूना (तालिका २) मा यसको उपस्थिति विश्वासनीय रूपमा प्रकट गर्न सम्भव तुल्यायो। डीएनए पृथकीकरणको लागि प्रस्तावित विधि प्राकृतिक बोट नमूनाहरूको विश्लेषणका लागि पनि लागू थियो।
तालिका २. वास्तविक समय पीसीआरको लागि कोलेटोट्रिचम कोकोडहरूको पहिचानको लागि प्रस्तावित परीक्षण प्रणालीको संवेदनशीलताको निर्धारण।
Образец | नमूना * मा डीएनए राशि, एनजी | थ्रेसोल्ड चक्र | सी। कोकोडहरूको पहिचान |
---|---|---|---|
Mycelium कोलेटोट्रिचम कोकोड | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
कन्दको बोक्रा १ | 50 | 32 | + |
कन्दको बोक्रा १ | 50 | 30 | + |
कन्दको बोक्रा १ | 50 | 31.5 | + |
आलु पात | 50 | 29.5 | + |
नोट। * पीसीआर उत्पादनहरूको मिश्रणमा।
परीक्षण प्रणालीको विशिष्टता फgi्गलको १ species प्रजातिहरूबाट निकालेको डीएनए नमूनाहरूमा परीक्षण गरिएको थियो। फ fun्गलका सबै प्रकारहरू प्रभावित र स्वस्थ फलहरू र टमाटर, आलु कन्दको पातहरूबाट लेखकहरूले अलग गरेका थिए; एउटा तनाव गहुँ जराबाट अलग गरिएको थियो (तालिका १)। फलको सतहबाट पृथक गरिएका प्रजातिहरूमध्ये, त्यहाँ प्रजातिहरू पनि छन् जुन टमाटरको लागि रोगजनक छैन (उदाहरणका लागि, Phellinus ferrugineovelutinus)।
अध्ययनहरूले देखाए कि सी। कोकोड डीएनए २०-२– को एक चक्रमा पत्ता लाग्यो, जबकि अन्य फgal्गल प्रजातिहरू पत्ता लागेन वा चक्र after० पछि संकेत दिए, जसलाई नाउन्स्पिक ध्वनि प्रभाव (तालिका)) लाई श्रेय दिन सकिन्छ।
तालिका various. विभिन्न प्रकारको मशरूमहरूको लागि परीक्षण प्रणाली परीक्षण गर्दै
च्याउको नाम | थ्रेसोल्ड चक्र |
कोलेटोट्रिचम कोकोडहरू 1 | 20.9 |
सी। कोकोडहरू 2 | 22.6 |
सी। कोकोडहरू 3 | 23 |
सी। कोकोडहरू 4 | 22 |
Fusarium oxysporum | > 40 |
एफ। भर्टिसिलियम | > 40 |
Rhizoctonia सोलानी | > 40 |
फोमोप्सिस चरणोली | > 40 |
Alternaria alternata | > 40 |
ए tomatophila | > 40 |
हेल्मिन्थोस्पोरियम सोलानी | > 40 |
फेलिनस फेरुगिनोवेलुटिनस | > 40 |
स्टेम्फिलियम भेसिकेरियम | > 40 |
Ilyonectria क्रेसा | > 40 |
क्लाडोस्पोरियम क्लैडोस्पोरियोइड्स | > 40 |
सी। फुलभम | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
पेनिसिलियम sp। | > 40 |
नोट। * सबै नमूनाहरूमा डीएनए को मात्रा १० एनजी थियो।
विकसित टेस्ट प्रणाली नेक्रोट्रोफिक रोगजनक र बीउ आलु कन्दको लक्षणको साथ टमाटर पातको नमूनाहरूमा सी कोकोड पहिचान गर्न प्रयोग गरियो। अध्ययनको लागि हामीले कोस्ट्रोमा, मस्को, कालुगा, निज्नी नोभगोरोड क्षेत्रहरूमा उत्पादन गरिएका बिभिन्न प्रजातिहरूको बीज कन्दहरू लिएका थियौं। सी। कोकोड डीएनएको उपस्थिति नमूनाहरूमा महत्वपूर्ण मानिन्थ्यो, जसको विश्लेषणमा थ्रेसोल्ड चक्र exceed exceed भन्दा बढी भएन। यो थ्रेसोल्ड मूल्य ०.०35 एनजी सी कोकोड डीएनए (थ्रेसोल्ड चक्र .0.05 33.5..2, तालिका २) को भरपर्दो निर्धारणको आधारमा चयन गरिएको थियो। above० भन्दा माथि थ्रेसोल्ड चक्रमा, केहि अन्य फgal्गल जातका nonspecific DNA पत्ता लाग्यो। यस दृष्टिकोणले सी। कोकोड डीएनएको महत्वपूर्ण उपस्थिति कोस्ट्रोमा, मस्को, कालुगा क्षेत्र र क्रास्नोडार क्षेत्रको येइस्क क्षेत्रको एक टमाटर पातमा उत्पादन गरिएको कन्दको samples नमूनाहरू पत्ता लगाइयो (टेबल 40,))।
तालिका potat. आलु कन्दहरूमा कोलेटोट्रिचम कोकोडहरूको पहिचान *
नमूना संख्या | आलु विविधता | बढ्दो ठाउँ | सी। कोकोडहरूको पहिचान | थ्रेसोल्ड चक्र |
---|---|---|---|---|
1 | रातो स्कार्लेट | कोस्ट्रोमा क्षेत्र | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | सान्ते | मस्को क्षेत्र | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | झुकोभस्की प्रारम्भिक | मस्को क्षेत्र | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | मौली | कालुगा क्षेत्र | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | काल्पनिक | कालुगा क्षेत्र | - | |
15 | गाला | निजनी नोभ्गरोड क्षेत्र। | - | |
16 | - |
नोट। * सबै नमूनाहरूमा डीएनए को मात्रा १० एनजी थियो।
तालिका tomato. टमाटरको पातमा कोलेट्रोट्रिकम कोकोडहरूको पहिचान *
नमूना संख्या | बढ्दो ठाउँ | सी। कोकोडहरूको पहिचान | थ्रेसोल्ड चक्र |
---|---|---|---|
1 | क्रास्नोडार क्षेत्र, क्रिमियन जिल्ला | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | क्रास्नोडार क्षेत्र, येइस्क जिल्ला | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
सबै नमूनाहरूमा डीएनए को मात्रा n० एनजी थियो।
हाम्रो द्वारा बनाईएको परिक्षण प्रणाली संवेदनशीलता र विशिष्टतामा बेलायती अनुसन्धानकर्ताहरू (कुलेन एट।, २००२) द्वारा विकसित गरिएको भन्दा अवर हुँदैन र बोटको नमूनाहरूको विश्लेषणको लागि उपयुक्त छ। बीज कन्दहरूको विश्लेषणको लागि यसको प्रयोगले सी कोकोडहरूको डीएनए पहिचान गर्न सम्भव बनायो क्षतिको कुनै बाहिरी संकेत बिना र पातहरूको संक्रमणको सफलतापूर्वक विश्लेषण गर्न।
आज सम्म, सी। कोकोडहरूको लागि इन्फेस्टेसन रसको लागि आलु कन्दको कुनै विश्लेषण गरिएको छैन। हाम्रो पहिलो अध्ययनले देखायो कि रसियन संघको विभिन्न क्षेत्रहरुमा उत्पादन गरिएको १ tested परीक्षण गरिएको बीज कन्दहरू मध्ये 16 ले सी। कोकोड समावेश गर्दछ। यसले देखाउँदछ कि आलु कन्दको कालो दाग रूसमा एउटा साधारण आलु रोग हो, र आलु बालीको मात्रा र गुण कम गर्न यसको भूमिकालाई कम महत्त्व दिइँदैन।
टमाटरको पातहरूको विश्लेषणले क्रिसनोडार क्षेत्रको येइस्क जिल्लाबाट एउटा पातमा सी। कोकोड डीएनएको महत्त्वपूर्ण उपस्थिति प्रकट गर्यो। यसभन्दा पहिले दक्षिणी रसियामा टमेटो क्षेत्रहरू जाँच्दा बेलायती परीक्षण प्रणाली (Cullen et al।, २००२) प्रयोग गर्दा सी। कोकोड युक्त पातहरू भेटिए, र केही क्षेत्रहरूमा सी। कोकोडले संक्रमित पातहरूको उच्च अनुपात फेला पर्यो (बेलोभ एट अल।, २०१))। क्रास्नोडार र प्रिमोर्स्की क्षेत्र, मस्को क्षेत्रमा, हामीले टमाटर फलहरू भेट्टायौं, जहाँबाट हामी सी कोकोडहरूको शुद्ध संस्कृतिहरू अलग गर्न सफल भयौं। यो सम्भव छ कि सी। कोकोड रूसमा टमाटरमा अहिले व्यापक रूपमा विश्वास गरिएको भन्दा बढी फराकिलो छ, र यसको हानिकारकतालाई पनि हल्का मानिएको छैन।
यसैले, आजसम्म, आलु र टमाटरमा सी। कोकोडहरूको व्यापक वितरणमा पर्याप्त जानकारी स .्कलन गरिएको छ।
आलु र टमाटर रोगको विकासमा यस फ funफसको भूमिकालाई राम्रोसँग बुझ्नको लागि, रसियामा यसको व्यापकता निगरानी गर्न, माटो र बीज संक्रमणको भूमिका, र भण्डारनको क्रममा घाटामा कालो दागको भूमिका अध्ययन गर्न आवश्यक छ। पीसीआर डायग्नोस्टिक्सको प्रयोगले यस कामलाई उल्लेख्य रूपमा सजिलो बनाउन सक्छ, र दुबै परीक्षण प्रणालीहरूको एक साथ प्रयोगले विश्लेषणको शुद्धतामा उल्लेखनीय वृद्धि गर्दछ।
यो काम रूसी विज्ञान फाउंडेशन नं। १--18--०००० from बाट अनुदान द्वारा समर्थित थियो।
लेख "माईकोलोजी र फाइटोपाथोलजी" पत्रिकामा प्रकाशित भयो (खण्ड 54 1, न। १, २०२०)।